附件1
手足口病標(biāo)本采集及檢測(cè)技術(shù)方案
一、采集標(biāo)本的種類、保存和運(yùn)輸
（一）糞便標(biāo)本。
采集病人發(fā)病3日內(nèi)的糞便標(biāo)本，用于病原檢測(cè)。糞便標(biāo)本采集量5-8g/份，采集后立即放入無(wú)菌采便管內(nèi)，外表貼上帶有唯一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽，4℃暫存12小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，-20℃以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于-70℃冰箱。
（二）咽拭子標(biāo)本。
采集病人發(fā)病3日內(nèi)的咽拭子標(biāo)本，用于病原檢測(cè)。用專用采樣棉簽，適度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有3-5ml保存液（含5%牛血清維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的15ml外螺旋蓋采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥，外表貼上帶有唯一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽。4℃暫存并在12小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，-20℃以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于-70℃冰箱。
（三）血清標(biāo)本。
各省（區(qū)、市）在手足口病流行年份中均應(yīng)采集EV71 和CVA16感染的手足口病患兒的雙份血清。采集急性期（發(fā)病0-7d）和恢復(fù)期（發(fā)病14-30d）雙份配對(duì)血清用于闡明和分析EV71和CVA16感染后IgG和IgM抗體的動(dòng)態(tài)變化，評(píng)價(jià)血清學(xué)抗體試劑盒的敏感性和特異性。靜脈采集3-5ml全血，置于真空無(wú)菌采血管中，自凝后，分離血清，將血清移到2ml外螺旋的血清保存管中，外表貼上帶有唯一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽。將血清置于-20℃以下冰箱中冷凍保存。
（四）皰疹液。
在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液中分離到病毒即可確診該病毒為病因，可同時(shí)采集多個(gè)皰疹作為一份標(biāo)本。先用75%的酒精對(duì)皰疹周圍的皮膚進(jìn)行消毒，然后用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內(nèi)裝有3-5ml保存液（含5%牛血清維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，采樣管外表貼上帶有唯一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽。所采集標(biāo)本4℃暫存立即（12h內(nèi)）送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于－70℃冰箱。
（五）肛拭子標(biāo)本。
采集病人發(fā)病3日內(nèi)的肛拭子標(biāo)本，用于病原檢測(cè)。用專用采樣棉簽，從患兒肛門輕輕插入，適度用力弧型左右擦拭數(shù)下，拔出后,迅速將棉簽放入裝有3－5ml保存液（含5%牛血清細(xì)胞維持液）的15ml外螺旋的采樣管中，采樣管外表貼上帶有唯一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽。在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋，并密封，以防干燥。
（六）尸檢標(biāo)本。
采集腦、肺和腸淋巴結(jié)等重要組織標(biāo)本，每一采集部位分別使用單獨(dú)的消毒器械。每種組織應(yīng)多部位取材，每部位應(yīng)取2-3份約5-10g的組織，淋巴結(jié)2個(gè)，分別置于15ml-50ml無(wú)菌的有外螺旋蓋的凍存管中，采樣管外表貼上帶有唯一識(shí)別號(hào)碼的標(biāo)簽。
（七）腦脊液標(biāo)本。
出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的病例，可采集腦脊液標(biāo)本，進(jìn)行病毒分離或核酸檢測(cè)。采集時(shí)間為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后3天內(nèi)，采集量為1.0-2.0ml。采集后立即裝入無(wú)菌帶墊圈的凍存管中，4℃暫存立即(12h內(nèi))送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于－70℃冰箱。但EV71感染神經(jīng)系統(tǒng)時(shí)，很難在腦脊液中檢測(cè)到EV71病原。
臨床標(biāo)本在運(yùn)輸和貯存過(guò)程中要避免反復(fù)凍融。標(biāo)本采集后要全程冷藏或冷凍保存和運(yùn)輸，12小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。依照《人間傳染的病原微生物名錄》，腸道病毒或潛在含有腸道病毒的標(biāo)本按B類包裝，置于冷藏保存盒內(nèi)運(yùn)輸，盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間?？刹捎藐懧坊蚝娇盏榷喾N運(yùn)輸方式，但在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)采取保護(hù)措施，避免強(qiáng)烈震動(dòng)、重力擠壓等現(xiàn)象。在送到省、地、市級(jí)CDC實(shí)驗(yàn)室時(shí)，包裝盒內(nèi)應(yīng)帶冰且包裝完整。在上送標(biāo)本的同時(shí)，需附帶相關(guān)的《手足口病病例臨床標(biāo)本采樣登記表》。
二、標(biāo)本采集注意事項(xiàng)
在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分離到病毒即可診斷該病毒為病因。用于采集咽拭子的無(wú)菌拭子要放在標(biāo)本保存液中，如含5%牛血清維持液。用于分子生物學(xué)診斷的標(biāo)本采集與病毒分離標(biāo)本的采集方法一樣。為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性，標(biāo)本應(yīng)在病例發(fā)病后盡早采集，盡快檢測(cè)。不能立即檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)冷凍保存。對(duì)于血清學(xué)診斷，急性期血清應(yīng)該在發(fā)病后盡早采集，恢復(fù)期血清在發(fā)病兩周后采集。標(biāo)本保存液的配置見(jiàn)下表：
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保存液
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Eagle`s液(MEM)
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80.5ml
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3%L-谷氨酰胺200mM
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1.0ml
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胎牛血清
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5.0ml
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7.5%NaHCO3溶液
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3.5ml
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青、鏈霉素
（各10000U/ml）
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10ml
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